h漫无码动漫av动漫在线播放,偷偷藏不住电视剧免费播放完整版,亚洲日本va中文字幕久久,亚洲精品成人无码中文毛片

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 分子克隆實驗---第三章:測序結(jié)果解讀

    分子克隆實驗---第三章:測序結(jié)果解讀

    發(fā)布時間: 2025-03-31  點擊次數(shù): 419次

    一代測序是克隆實驗中常見的下游實驗?,F(xiàn)代 DNA 測序技術(shù)源于 Sanger 鏈末端終止測序法,其工作原理與 Sanger 測序不同的是 4 組反應(yīng)的雙脫氧核苷酸分別用不同的熒光分子標(biāo)記,每個試管的產(chǎn)物在光激發(fā)下發(fā)出不同顏色的熒光,延伸反應(yīng)和鏈終止完成后,將全部 4 組反應(yīng)物混合,在同一泳道進行凝膠電泳,通過激光束激發(fā)熒光分析不同位置堿基的熒光顏色完成測序分析。


    一般情況下,測序信號文件多為 *.ab1 文件,該文件能夠得到每個堿基的測序峰型及整體質(zhì)量;*.seq 文件則為 ab1 文件導(dǎo)出得到的測序結(jié)果序列,ab1 文件中已具有堿基序列信息,因此 *.seq 文件可不作重點關(guān)注。


    一代測序的每次測序反應(yīng)能夠產(chǎn)生約 600-900bp 堿基信息,測序開始的 5 端約 50bp 左右的測序信號不穩(wěn)定,檢測 800bp 左右之后信號開始衰減,各種波之間有重疊等情況。這部分結(jié)果信息不準(zhǔn)確,不建議參考使用。

    理想狀態(tài)的測序信號應(yīng)當(dāng)是獨立單一的峰形信號,波峰與波谷清晰,峰與峰之間的距離均勻,波峰底部沒有雜峰干擾,此時得到的堿基信息可信度超高;測序信號出現(xiàn)雙峰、套峰等情況時,該處堿基信息可信度低,需要其他測序結(jié)果共同比對分析



           

    測序問題的主要原因:
    ◆ 套峰
    a) 全雙峰:多引物結(jié)合位點(菌液、質(zhì)粒);非特異擴增(PCR 產(chǎn)物);
    b) 前雙峰:多引物結(jié)合位點,其中一套模板測序中斷(菌液、質(zhì)粒);多引物結(jié)合位點(PCR
    擴增未純化產(chǎn)物);引物二聚體或小片段干擾(PCR 產(chǎn)物純化非切膠樣品);
    c) 中間雙峰:非單克隆(菌液、質(zhì)粒);堿基缺失或等位基因雙模板(PCR 擴增未純化產(chǎn)物);
    d) 后雙峰:非單克隆(菌液、質(zhì)粒);堿基缺失(PCR 產(chǎn)物)。


    ◆ 測序信號

    a) 無信號:引物結(jié)合位點不存在或被破壞;
    b) 信號差:引物或模板的質(zhì)量不高,或引物和模板匹配性低,或樣本濃度偏低;
    c) 信號衰減:可能因測序序列的特殊結(jié)構(gòu)導(dǎo)致,如 Poly 結(jié)構(gòu)、重復(fù)序列、回文結(jié)構(gòu)、發(fā)卡結(jié)構(gòu)、GC 富集、AT 富集等;若為正常峰形后逐漸衰減,可能模板反應(yīng)量不足;
    d) 信號中斷:模板存在高級結(jié)構(gòu),導(dǎo)致 dNTP 和 ddNTP 在某位點無法與模板結(jié)合;
    e) 測序移碼:測序開端移碼可能是引物降解,局部移碼可能樣本存在高級結(jié)構(gòu);

    f) 測序底峰干擾:可能測序引物不純;可能測序樣品不純混有正、反向引物。


    優(yōu)化方案:套峰

    二聚體、小片段干擾:凝膠電泳,切膠純化回收;                                                          
    多引物結(jié)合位點:更換引物測序或反向測通;
    堿基缺失:構(gòu)建單克隆后測序;
    非單克?。涸谳d體構(gòu)建克隆正確下重新挑取單克隆測序;
    非特異性擴增:優(yōu)化反應(yīng)條件重新制備;

    等位基因雙模板:構(gòu)建單克隆后測序。


    測序信號

    無信號:更換引物或重新提供樣品測序;
    信號差:提供高質(zhì)量樣品測序;
    信號衰減:特殊結(jié)構(gòu)導(dǎo)致衰減,建議反向測序拼接;若正常峰形后逐漸衰減:提供高質(zhì)量樣品;
    測序中斷:建議反向測序測通;
    測序底峰干擾:重新制備模板,引物 PAGE 膠純化。


    安培生物致力成為推動生命科學(xué)進步值得信賴的合作者

    深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)??梢栽诘谝粫r間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持,深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨,配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,隨時為客戶提供服務(wù)












產(chǎn)品中心 Products
无人在线观看高清完整视频 | 日本人xxxxxxxxx69| 人妻哺乳奶头奶水| 国产精品久久人妻无码网站仙踪林| 国产97色在线 | 国产| 久久久久亚洲av成人网人人网站| 国产精品久久久久精品三级卜| 日韩夜夜高潮夜夜爽无码| 日本少妇被黑人猛cao| 婷婷综合亚洲爱久久| 男人用嘴添女人下身免费视频| 欧美超级乱婬视频播放| 精品人妻AV一区二区三区| 欧美又大又色又爽aaaa片| 亚洲色综合狠狠综合区| 无码办公室丝袜ol中文字幕 | 亚洲GV天堂无码男同在线观看| 亚洲国产一区二区A毛片| 人妻少妇伦在线无码专区视频| 一性一交一口添一摸视频| 少妇粗话肉麻对白视频6| 亚洲爆乳成人无码aaa片漫画| 久久久久免费精品国产| 国产欧美精品123区发布| 西西444www无码大胆| 熟女国产精品视频一区二区三区| 97porm国内自拍视频| 日韩人妻无码中文字幕视频| 免费无码国产v片在线观看| 夜精品无码a片一区二区蜜桃 | 国产欧美久久久精品影院| 国产精品无码专区在线播放| 女人18毛片a级毛片免费视频| 国产乱人激情h在线观看| 欧美高清性色生活片免费观看| 精品无码久久久久国产| 国产精品亚洲日韩欧美色窝窝色欲| 99久久久无码国产精品免费砚床 | 97性无码区免费| 国产精品亚洲AV色欲三区| 人妻熟女欲求不满在线|