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    H1人胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)常見問題

    發(fā)布時(shí)間: 2023-02-24  點(diǎn)擊次數(shù): 1135次

    疑難解答

    是否還需要往H1細(xì)胞專用培養(yǎng)基中補(bǔ)充或添加成分?

    不需要。H1細(xì)胞培養(yǎng)基中各個(gè)成分的質(zhì)量和濃度都經(jīng)過了優(yōu)化實(shí)驗(yàn),支持人ESC/iPSC的長(zhǎng)期培養(yǎng),無(wú)需再自行添加。

    培養(yǎng)基中有沉淀狀物質(zhì)是否是質(zhì)量問題?

    添加劑在解凍過程中,若有少量沉淀析出,屬于正?,F(xiàn)象,不影響使用,請(qǐng)充分混勻后與基礎(chǔ)培養(yǎng)基混合。但添加劑不能在37℃解凍,否則會(huì)析出大量沉淀,影響培養(yǎng)基的效價(jià)。如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)大量沉淀,請(qǐng)不要使用。

    •是否能在37 ℃反復(fù)水浴H1細(xì)胞專用培養(yǎng)基?

    不能。頻繁地在4℃和37℃之間轉(zhuǎn)換會(huì)導(dǎo)致H1細(xì)胞專用培養(yǎng)基中含有的因子失活,H1細(xì)胞專用培養(yǎng)基在使用前平衡至室溫即可。

    • H1細(xì)胞在傳代后不貼壁怎么解決?

    造成H1傳代后不貼壁的最可能的原因:

    ① 細(xì)胞消化時(shí)間不合適;②消化后吹打次數(shù)不合適,使得完成傳代后細(xì)胞集落過大或過小。

    • H1分化怎么處理?

    ① 細(xì)胞在剛復(fù)蘇或傳代時(shí),小的細(xì)胞團(tuán)不呈現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的克隆形態(tài),培養(yǎng)幾天或傳代后可恢復(fù)。②如果H1分化的表現(xiàn)為干細(xì)胞克隆形態(tài)良好,克隆周邊出現(xiàn)散在的分化細(xì)胞,可通過高比例傳代(≥1:10),使得分化細(xì)胞的密度減少,低密度的分化細(xì)胞可被H1培養(yǎng)體系篩選去除,如未全去除,可用細(xì)胞刮或巴斯德管刮除。

    ② 如果H1分化的表現(xiàn)為克隆內(nèi)部松散,邊緣不平滑,在分化比例小或分化不嚴(yán)重的情況下,可通過連續(xù)傳代2 ~ 3次恢復(fù),如果分化嚴(yán)重,建議棄除。

    • 細(xì)胞復(fù)蘇率低是什么原因?

    細(xì)胞復(fù)蘇需使用H1細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)基,可大大提高細(xì)胞的復(fù)蘇效率。復(fù)蘇過程中,轉(zhuǎn)移細(xì)胞、吹打混勻和重懸細(xì)胞時(shí),吹打力度要輕柔,并盡量減少吹打次數(shù),細(xì)胞接種后,即刻在顯微鏡下觀察細(xì)胞團(tuán)塊的大小,4 ~ 10個(gè)細(xì)胞的團(tuán)塊為最佳。如果吹打力度過大或次數(shù)過多,導(dǎo)致細(xì)胞分散成單細(xì)胞,細(xì)胞復(fù)蘇率將偏低。


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